干扰素活性检测可以使用细胞株

1）用TF-1细胞增殖抑制实验
1．细胞株的培养：TF-1细胞培养于含5％小牛血清，2ng/ml重组人GM-CSF和抗生素的RPMI-1640培养液中，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养到2×105细胞/ml。将细胞稀释到5×104/ml，继续分瓶培养。UT-7/EPO细胞培养于含10％小牛血清，11U/ml重组人EPO和抗生素的IMDM培养液中，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养到10×105细胞/ml。将细胞稀释到2×105/ml，继续分瓶培养。
2．干扰素活性检测
1）在TF-1细胞生长到2×105/ml浓度时收集细胞。用RPMI-1640培养液洗涤细胞2次。用含5％小牛血清，500pg/ml重组人GM-CSF（或8.6IU/ml EPO）和抗生素的RPMI-1640培养液将细胞配成1×105/ml的浓度。取96孔细胞培养板，每孔加100μl细胞悬液。
2）用含5％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液系列稀释干扰素待测样品和标准品，每孔加100μl稀释液。每孔稀释度3个复孔。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时。
3）加入0.5μCi[3H]脱氧胸苷（10μl），继续培养4小时。将细胞收集到玻璃纤维滤膜上，在液体闪烁计数仪上计数cpm值。也可以用MTT检测法或其它方法检测细胞数。根据标准品的标准曲线判定待测样品中干扰素的含量。如果用UT-7/EPO细胞检测干扰素活性，在细胞生长达到5×105/ml浓度时取UT-7，洗涤后使用。96孔细胞培养板每孔加2×104细胞，培养液是10％小牛血清，0.6IU/ml重组人EPO和抗生素的IMDM培养液。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养72小时。其它同TF-1细胞。