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面对各种不同性能的进口PCR仪如何选择。

发布时间:2013-11-15

    PCR因操作便当、运转速度快、实验结果精确,遭到越来越多的分子生物学研讨者喜爱。在实验技术成熟的今天,或许对你来说,最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种进口PCR仪——你要咨询实验室成员的意见、剖析实验室目前乃至未来的需求、均衡实验室的预算,更要细致研讨各种极富诱惑力的宣传材料。面对各种不同性能的产品,您又该如何选择呢?
  首先倡议大家走出认识进口PCR仪的两个误区:
  误区一:仪器通道越多越好
  随着PCR技术的成熟运用,多重扩增越来越繁华,进口PCR仪也不能幸免。从最初上海拜格生物科技开展有限公司推出的单通道进口PCR仪开展到往常各个厂家都推出4通道、5通道以至6通道进口PCR仪,头昏眼花的选择让人无所适从,就有人一不当心走进了“通道越多越好”的误区。
  在运用有些厂家5通道的仪时,为了确保实验结果的准确性和精确性都要在实验中运用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ,这些荧光染料都必需单独运用一个检测通道。这样以来,真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只要4个,而且运用校正染料可能会增加后期的运用本钱。有的PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的,有效检测通道也绝非像宣传材料中声称的那么多。在购置前确认进口PCR仪器的有效检测通道尤为重要,不能单单只听宣传。
  思索多重PCR的通道数的时分也应该从实验室实践状况动身,多重PCR并非人人适用、人人可用,由于它使实验复杂化了。
  误区二: 进口PCR仪无需梯度功用
  关于运用染料法的定量PCR反响,固然有各种各样的PCR引物设计软件或者经历公式计算熔解温度(Tm值),但运用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差别会很大。引物的熔解温度决议了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化,关于特殊片断,经历公式得到的数据不一定能得出精确的结果,退火温度细微的差别对结果都可能产生决议性的影响,因此“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的呈现局部处理了一些问题——在反响过程中每个孔的温度控制条件能够在指定范围内依照梯度变化,依据结果,一步就能够探索出最合适的反响条件。
  不单退火温度,连变性温度和延伸温度都能够优化——关于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个十分重要,由于Taq和校正酶的最佳反响温度可能有显著差别,优化延伸温度就显得很重要。
  运用有梯度功用的PCR能够一次完成以往屡次实验才干完成的优化过程,简化了探索 PCR反响条件的繁琐实验,既俭省实验时间进步效率,又俭省实验本钱。
皓庄普通的进口PCR仪

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  • 面对各种不同性能的进口PCR仪如何选择。
  • 发布时间:2013-11-15 00:00
  •     PCR因操作便当、运转速度快、实验结果精确,遭到越来越多的分子生物学研讨者喜爱。在实验技术成熟的今天,或许对你来说,最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种进口PCR仪——你要咨询实验室成员的意见、剖析实验室目前乃至未来的需求、均衡实验室的预算,更要细致研讨各种极富诱惑力的宣传材料。面对各种不同性能的产品,您又该如何选择呢?
      首先倡议大家走出认识进口PCR仪的两个误区:
      误区一:仪器通道越多越好
      随着PCR技术的成熟运用,多重扩增越来越繁华,进口PCR仪也不能幸免。从最初上海拜格生物科技开展有限公司推出的单通道进口PCR仪开展到往常各个厂家都推出4通道、5通道以至6通道进口PCR仪,头昏眼花的选择让人无所适从,就有人一不当心走进了“通道越多越好”的误区。
      在运用有些厂家5通道的仪时,为了确保实验结果的准确性和精确性都要在实验中运用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ,这些荧光染料都必需单独运用一个检测通道。这样以来,真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只要4个,而且运用校正染料可能会增加后期的运用本钱。有的PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的,有效检测通道也绝非像宣传材料中声称的那么多。在购置前确认进口PCR仪器的有效检测通道尤为重要,不能单单只听宣传。
      思索多重PCR的通道数的时分也应该从实验室实践状况动身,多重PCR并非人人适用、人人可用,由于它使实验复杂化了。
      误区二: 进口PCR仪无需梯度功用
      关于运用染料法的定量PCR反响,固然有各种各样的PCR引物设计软件或者经历公式计算熔解温度(Tm值),但运用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差别会很大。引物的熔解温度决议了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化,关于特殊片断,经历公式得到的数据不一定能得出精确的结果,退火温度细微的差别对结果都可能产生决议性的影响,因此“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的呈现局部处理了一些问题——在反响过程中每个孔的温度控制条件能够在指定范围内依照梯度变化,依据结果,一步就能够探索出最合适的反响条件。
      不单退火温度,连变性温度和延伸温度都能够优化——关于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个十分重要,由于Taq和校正酶的最佳反响温度可能有显著差别,优化延伸温度就显得很重要。
      运用有梯度功用的PCR能够一次完成以往屡次实验才干完成的优化过程,简化了探索 PCR反响条件的繁琐实验,既俭省实验时间进步效率,又俭省实验本钱。
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